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实时荧光定量 PCR(qPCR)简介
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实时荧光定量 PCR(Real-time Quantitative PCR),缩写为 qPCR,即在 PCR 反应体系中加入荧光指示剂,通过实时测定荧光信号强度来监控扩增反应进程的方法(PCR 产物的量与荧光信号呈线性关系)。该方法可对特异模板进行定性,也可根据 Ct 值对初始产物定量,因此,广泛应用于科研领域,是现阶段分子诊断主流技术平台,临床诊断的“金标准”,尤其广泛应用于感染性疾病(如:新冠病毒,呼吸道、消化道、生殖道和其他病原体)和肿瘤伴随诊断领域。
qPCR 实验有两种检测方法:染料法和探针法。染料法,即在 PCR 体系中添加双链 DNA 嵌合染料,这种染料在游离状态时不发光,随着 PCR 扩增的进行,染料不断结合到累积的双链 DNA 产物上发出荧光。探针法,即在 PCR 体系中添加带有荧光基团和淬灭集团标记的探针,探针在完整状态时不发光,退火时特异结合到 PCR 模板上,延伸时,DNA 聚合酶的 5’-3’ 外切酶活性将结合上的探针切断发出荧光,从而实现 qPCR 检测。值得一提的是,染料法成本较低,也比较简单,但会检测反应中产生的所有双链 DNA,只能检测单重靶标,也会因为非特异扩增和引物自扩增引起假阳性或定量不准。探针法 qPCR 实验除了特异的 PCR 引物还需要设计合成一段特异的荧光基团标记的寡核苷酸探针,虽然增加了检测成本,但是极大的提高了特异性,并且可以进行多重靶标检测,以及更精准的 SNP 检测。
值得信赖的 qPCR 结果需要检测试剂具备高灵敏度、特异性、一致性和更强的抑制成分耐受度。因智拓生物自主研发及生产 qPCR 检测所需的高品质酶原料:Taq DNA 聚合酶,逆转录酶、RNase 抑制剂、热敏 UDG 及其他辅助试剂。除了固定规格 Secifications的货架成品外,我们还可根据用户实际需求进行 OEM 定制,如:特定质检要求、浓度、包装规格 Secifications等。我们更期待与您进行深度合作,以开发您产品所需的特定酶/蛋白制剂,升级改造酶的特性、优化反应缓冲液配方、特定储存液配方(如:可冻干版本)等,共同推动分子诊断行业的高速发展。
荧光定量 PCR(qPCR)
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